Panduan dan Tabel Referensi Lengkap MPN 3-Tabung

Dokumen ini merupakan panduan referensi laboratorium untuk membaca, menginterpretasikan, dan menghitung estimasi kepadatan populasi mikrob menggunakan metode statistik Most Probable Number (MPN) dengan seri 3-tabung. Tabel dan aturan pembacaan di bawah ini merujuk pada standar baku U.S. Food and Drug Administration – Bacteriological Analytical Manual (FDA BAM Appendix 2).

1. Prinsip Dasar

Tabel standar MPN 3-tabung didasarkan pada inokulasi sampel menggunakan 3 tingkat pengenceran desimal berturut-turut (faktor pengenceran kelipatan 10).

Volume atau bobot ekuivalen sampel asli (inoculum) yang menjadi dasar perhitungan tabel standar ini adalah:

• Tabung Seri 1: $0.1\text{ g}$ atau $\text{mL}$ (setara dengan $1\text{ mL}$ dari pengenceran $10^{-1}$)
• Tabung Seri 2: $0.01\text{ g}$ atau $\text{mL}$ (setara dengan $1\text{ mL}$ dari pengenceran $10^{-2}$)
• Tabung Seri 3: $0.001\text{ g}$ atau $\text{mL}$ (setara dengan $1\text{ mL}$ dari pengenceran $10^{-3}$)

2. Tabel Referensi MPN 3-Tabung (Inokulum 0.1, 0.01, dan 0.001 g/mL)

Nilai pada tabel berikut merupakan Indeks MPN per gram atau per mL sampel asli beserta interval kepercayaan 95% (95% Confidence Interval), dengan asumsi seri pengenceran yang diinokulasikan adalah $10^{-1}$, $10^{-2}$, dan $10^{-3}$.

3. Panduan Pemilihan Seri Pengenceran

Dalam pengujian rutin, kita sering menginokulasi lebih dari 3 tingkat pengenceran (misalnya 5 seri dari $10^{-1}$ hingga $10^{-5}$) agar rentang populasi bakteri yang tinggi tetap terukur. Untuk membaca tabel MPN, Anda harus memilih 3 tingkat pengenceran berurutan guna membentuk kode 3 digit.

Aturan Penentuan 3 Digit MPN:

1. Aturan 1 (Standar): Pilih pengenceran tertinggi (paling encer) yang seluruh tabungnya positif (bernilai 3), diikuti dua tingkat pengenceran berikutnya.

   • Hasil pengamatan ($10^{-1}$ s.d. $10^{-5}$): 3 - 3 - 2 - 1 - 0
   • Cara memilih: Ambil angka 3 yang paling kanan (pada $10^{-2}$) beserta dua pengenceran setelahnya ($10^{-3}$ dan $10^{-4}$).
   • Kombinasi terpilih: 3 - 2 - 1 (mewakili seri $10^{-2}, 10^{-3}, 10^{-4}$).

2. Aturan 2 (Semua $< 3$): Jika tidak ada pengenceran yang seluruh tabungnya positif, pilih 3 pengenceran terendah (paling pekat).

   • Hasil pengamatan ($10^{-1}$ s.d. $10^{-5}$): 2 - 1 - 0 - 0 - 0
   • Cara memilih: Ambil tiga seri pengenceran pertama.
   • Kombinasi terpilih: 2 - 1 - 0 (mewakili seri $10^{-1}, 10^{-2}, 10^{-3}$).

3. Aturan 3 (Tabung positif di pengenceran tinggi): Jika masih terdapat hasil positif setelah 3 seri yang dipilih, jumlahkan nilai positif tersebut ke digit ketiga.

   • Hasil pengamatan ($10^{-1}$ s.d. $10^{-5}$): 3 - 2 - 0 - 1 - 0
   • Cara memilih: Tiga seri utama yang dipilih berdasarkan Aturan 1 adalah 3 - 2 - 0 ($10^{-1}, 10^{-2}, 10^{-3}$). Karena terdapat angka 1 pada pengenceran $10^{-4}$, tambahkan angka tersebut ke digit ketiga ($0 + 1 = 1$).
   • Kombinasi terpilih: 3 - 2 - 1 (tetap mewakili seri $10^{-1}, 10^{-2}, 10^{-3}$).

4. Rumus Konversi Faktor Pengenceran

Karena tabel standar di atas dikalibrasi untuk seri $10^{-1}, 10^{-2}, 10^{-3}$ (di mana tabung tengah memiliki inokulum $0.01\text{ g/mL}$), penggunaan seri pengenceran yang lebih tinggi mengharuskan Anda mengalikan nilai Indeks MPN dari tabel dengan Faktor Koreksi Pengenceran:

Atau dalam bentuk ekuivalen yang sering digunakan di laboratorium:

Keterangan:

• $V_{\text{tengah}}$ = Massa atau volume sampel asli ($\text{g}$ atau $\text{mL}$) pada tabung seri tengah dari 3 kombinasi yang dipilih (misal: untuk seri $10^{-2}, 10^{-3}, 10^{-4}$, maka $V_{\text{tengah}} = 10^{-3} = 0.001\text{ g}$).

5. Contoh Perhitungan Lengkap

Referensi

• Blodgett, R. (2020). BAM Appendix 2: Most Probable Number from Serial Dilutions. U.S. Food and Drug Administration (FDA) Bacteriological Analytical Manual.